| master | التاريخ: السبت, 23/10/2010, 5:45 PM | رسالة # 1 |
|
رائد
مجموعة: المشرفين
رسائل: 69
حالة: Offline
| كیفیة الحصول على الأغشیة البلازمیة :
الطریقة : ذات مرحلتین ھما :
عملیة الطحن .
فصل الأغشیة من محلول الإستخلاص .
المرحلة الأولى : عملیة الطحن
یقصد بھا تمزیق الخلایا لغرض إستخلاص أغشیتھا بعد ذلك :
تركیب الطحان :
أ- أنبوبة ذات زجاج خاص منتظمة القطر ذات فوھة متسعة .
ب- ساق معدنیة تدخل فى الإنبوبة وتنتھى بقطعة من التفلون ( من اللدائن القویة ) بحیث تترك مسافة صغیرة جداً
بینھا وبین جدار الأنبوبة .
ج- یتصل طرف الساق المعدنیة الآخر بمحرك یتم التحكم فى سرعة دورانھ .
طریقة إستخدام الجھاز :
أ- یوضع النسیج المطلوب طحنھ فى أنبوبة الطحان مع قلیل من محلول مناسب وھو غالباً محلول السكروز ذى
الضغط الأسموزى المنخفض وھو من أنسب المحالیل المستخدمة .
( لاتستخدم المحالیل الملحیة إلا فى حالات خاصة ( مثل إستخلاص خلایا الطحال ) لأنھا تؤدى إلى تكدس الدقائق
التحت خلویة ( أى الأجزاء الناتجة عن تفتت الخلیة )
ب- توضع الساق الرأسیة داخل الأنبوبة فى وضعھا الصحیح .
ج- یدار المحرك فتدور الساق المعدنیة لیرتفع النسیج ویتم طحنھ فى المسافة الضیقة بین جزء التفلون والجدار
الزجاجى , ومع إستمرار الدوران یطحن النسیج تماماً .
ملاحظات ھامة :
- فى حالة الأنسجة الحیوانیة الرخوة تستخدم تقنیات قوى طحن متوسطة .
- فى حالة الأنسجة النباتیة أو الخلایا البكتیریة تستخدم قوى كبیرة تصاحبھا u1590 ضغوط ودرجات حرارة عالیة .
- فى حالة الأنسجة الأكثر صلابة یتم تبرید النسیج حتى التجمد , ثم یضغط داخل وعاء ینتھى بثقب ضیق , ومع
إذدیاد معدل سریان المحلول الحامل للنسیج فى إتجاه الثقب یندفع النسیج المتجمد خلال ھذا الثقب فیتم تمزیق ھذا
النسیج تماماً .
المرحلة الثانیة : فصل الأغشیة من محلول الإستخلاص : تستخدم لذلك عدة أسالیب منھا :
١) تقنیة الطرد المركزى التجزیئى : " وھى الطریقة المثلى " )
الأساس العلمى لھذه الطریقة : تعریض محلول الإستخلاص لقوة جاذبیة صناعیة تفوق طاقة الحركة الحراریة
العشوائیة للدقائق( وھى المسئولة عن وجود الدقائق معلقة فى المحلول لیتم ترسیب ھذه الدقائق إلى القاع ) .
خطوات العمل :
أ- یدار الجھاز حتى تتعادل قوة الطرد المركزیة مع الطاقة العشوائیة للدقائق وعندما تزید القوة الأولى عن الثانیة
یتم ترسیب الدقائق فى قاع الأنبوبة ویتوقف معدل ترسیب الدقائق على حجم ھذه الدقائق وشكلھا وكثافتھا .
ب- مع عمل إذدواج من قوى الطرد المركزى والزمن الذى تعمل خلالھ یمكن الحصول على سلسلة من المكونات
التى یتم فصلھا مع كل إذدواج بحیث یكون كل مكون غنیاً بأنواع معینة من الأنسجة .
الحصول على مستخلص غشائى نقى بھذه الطریقة :
الأساس العلمى : لكل دقیقة من الدقائق المعلقة عامل طفو خاص بھا فى وسط لھ كثافة معینة – لذلك یستخدم فى
ھذه التقنیة محلول سكروز متدرج الكثافات .
الطریقة :
أ- یوضع فى أنبوبة الطرد المركزى قدراً من محلول الإستخلاص متدرج الكثافة .
ب- یدار جھاز الطرد المركزى بقوة معینة لتفصل المكونات فى إتجاه قاع الأنبوبة .
ج- یستقر كل نوع من المكونات معلقاً فى إحدى الطبقات ذات الكثافة المعینة حیث تتعادل قوة عامل الطفو عند ھذه
الكثافة .
٢) تقنیة ھجرة الدقائق المشحونة فى مجال كھربى : )
وھى أسلوب آخر لفصل الأغشیة من محلول الإستخلاص .
٣) تقنیة الكروماتوجرافى التآلفى : )
وھى أسلوب ثالث لنفس الغرض
ولكن لاتستخدم الوسیلتان الأخیرتان إلا فى حالات خاصة مع توافر عوامل معینة .
٢] الغشاء البلازمى ]
تمكن العلماء من التوصل إلى تصور نماذج لتركیب الغشاء البلازمى منھا النماذج التالیة وھى فى صورة تطوریة
كالآتى :
( أ ) نموذج دافسون – دانییلى – روبرتوسون :
١- الغشاء البلازمى مكون من نظام دھنى منتظم فى طبقتین ( كما تصوره جورتروجرندل )
٢- الطبقتان مكونتان من الفوسفولیبیدات ( الدھون المفسفرة ) بحیث تقع الأجزاء المستقطبة على السطحین
الخارجى والداخلى وتقع الأجزاء غیر المستقطبة فى جوفھ .
٣- إقترح واضعو النموذج أن یكون المكون البروتینى للغشاء على شكل طبقة خارجیة وأخرى داخلیة تغلف كل
منھما الجزء المستقطب – وھذا یفسر التوتر السطحى المنخفض الذى یمیز الأغشیة على السطحین .
وقد أثنتت الدراسات والأبحاث بالأشعة السینیة والمجھر الإلكترونى للغشاء البلازمى دقة ھذا النموذج المقترح –
وتتشابھ جمیع أغشیة الخلیة مع ھذا النظام – لذلك إقتُرحت " نظریة الغشاء الموحد "
أوجھ القصور فى النموذج السابق :
١- النموذج المقترح لم یقدم تفسیراً مقنعاً لعملیات نقل المواد عبر غشاء الخلیة .
٢- وضع البروتین كطبقة سطحیة فى الداخل والخارج لتفسیر التوتر السطحى المنخفض لا مبرر لھ لأن
المجموعات المستقطبھ فى تركیب الفوسفولیبیدات تتمیز أصلاً بأن لھا توتر سطحى منخفض .
(ب) نموذج سنجر ووالاش ( النموذج الفسیفسائى أو الموزایكى ) :
١- الغشاء یتكون من طبقتین من الفسفو لیبیدات تتجھ مجموعاتھا المستقطبھ للخارج بینما تضم الحشوة الأجزاء
غیر المستقطبة
٢- یشغل البروتین مواقع متفرقة وبذلك نجد مواقع دھنیة تماماً ومواقع أخرى بروتینیة تماماً ( فسیفسائى ) .
وبذلك یحدث نوع من الإرتباط بین الأجزاء المستقطبھ على الفوسفولیبیدات وبین البروتین وبین الوسط المائى
المحیط .
وظائف البروتین فى الغشاء البلازمى :
أ- المساھمة فى دعم الغشاء .
ب- یعمل كإنزیم لدفع التفاعلات .
ج- یعمل كحامل لنقل المواد .
د- یعمل كمناطق فصل بین الدھون .
وبذلك یقدم ھذا النموذج تفسیراً مقبولاً لعملیات نقل المواد خاصة المواد المستقطبة ( مثل الماء ) أو المواد التى
تذوب فیھا .
انتظرونا في باقي الموضوعات ............ تابعونا
|
| |
| |
